服务类别：
1、siRNA合成： 对于瞬时基因沉默实验，化学合成siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性；针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到75％（在转染效率大于80％的情况下）。
A ：普通siRNA：均有HPLC纯化，100％除去尚未配对的单链 ；
B ：化学修饰siRNA：利用2’-Fluoro或2’-Ome修饰以提高siRNA在血清和培养基种的稳定性，作用时间长于普通siRNA；
C ：荧光标记siRNA；
D ：siRNA对照，包括普通阴性对照（与目的靶细胞中所有基因无同源性的阴性对照）、荧光标记的阴性对照（更容易观察，可以方便地在荧光显微镜下观察转染的效率，有利于优化转染条件）和siRNA阳性对照（作为一个实验系统检查，确保在您的实验方法是可靠的；常用的siRNA阳性对照有LaminA/C，Beta-Actin，P53，GAPDH等） 。
2、microRNA干扰载体构建：RNAi载体表达可以稳定地研究基因功能，载体在细胞种持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。 RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制，相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构，并具有采用GFP进行表达追踪的优点。每个基因设计的4条序列我们保证至少有2条可以达到至少70％转录水平的Knockdown效率（在转染效率大于80％的情况下）。
3、RNAi干扰效果检测：应用RT-PCR方法检测mRNA水平的基因敲除效果；通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲除效果。

具体描述：
1.1 siRNA合成

在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA 3’端12个碱基的位置切割mRNA。

实验流程：
1）根据序列信息，进行化学合成
2）纯化及定量
3）冻干处理
4）细胞转染预实验，优化转染条件
5）瞬时转染或稳定转染
6）RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化

客户提供：
1）  目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）以及技术要求（包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等）
2）  细胞株和详细的细胞培养的操作步骤
3）  一抗（如果需要Western blot检测）

我们提供：
1）转染效率分析
2）Knockdown结果

质量保证：
针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75％（在转染效率大于80％的情况下）。

      RNAi可通过直接向细胞内导入化学合成siRNA或将编码发夹RNA靶序列的双链DNA oligo克隆至载体中再转染至细胞内，相对于前者成本高、持续表达时间短的缺陷，国外知名公司的 miR RNAi表达载体采用Pol Ⅱ启动子表达人工设计的小RNA（miRNA），后者从长的转录本被加工，可表达出与目的基因100％同源的人工化的miRNAs，对靶基因进行切割进而导致特异性的mRNA的降解。此外，该载体还具有以下优点：超过70％的基因沉默效率；miRNA靶序列在哺乳细胞中的瞬时表达或持续表达；更便捷的GFP荧光检测手段，方便追踪miRNA的表达。

实验流程：
1）针对特定基因，设计miR RNAi序列，合成该序列并退火生成双链DNA
2）将DNA与载体连接并转化
3）测序验证miRNA序列的正确性
4）细胞转染预实验，优化转染条件
5）瞬时转染或稳定转染
6）RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化

客户提供：
1）  目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）
2）  细胞株和详细的细胞培养的操作步骤
3）  一抗（如果需要Western blot检测）

我们提供：
1）  构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌
2）  测序报告
3）  转染效率分析
4）  Knockdown结果

质量保证：
针对某靶基因设计的3条miRNA序列，在转染效率>80％的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70％转录水平的沉默效率。